Orodha ya maudhui:
Video: Jinsi ya kupakia gel electrophoresis?
2024 Mwandishi: Miles Stephen | [email protected]. Mwisho uliobadilishwa: 2023-12-15 23:41
Kupakia Sampuli na Kuendesha Geli ya Agarose:
- Ongeza kupakia buffer kwa kila sampuli zako za DNA.
- Baada ya kuimarishwa, weka agarose jeli ndani ya jeli sanduku ( electrophoresis kitengo).
- Jaza jeli sanduku na 1xTAE (au TBE) hadi jeli imefunikwa.
- Kwa uangalifu mzigo ngazi ya uzito wa Masi ndani ya mstari wa kwanza wa jeli .
Kuhusiana na hili, ni kiasi gani cha DNA unahitaji kupakia kwa electrophoresis ya gel?
Kiasi cha DNA ya kupakia kwa kisima ni kutofautiana. Kiasi kidogo cha DNA ambayo inaweza kugunduliwa na ethidum bromidi ni 10 ng. DNA kiasi cha hadi ng 100 kwa kila kisima kitasababisha mkanda mkali, safi kwenye bromidi ya ethidiamu iliyotiwa rangi. jeli.
Kwa kuongeza, kwa nini buffer hutumiwa katika electrophoresis ya gel badala ya maji? The bafa inahitajika kudumisha pH ya suluhisho la DNA karibu na kiwango cha upande wowote kwa sababu ikiwa inaweza kuwa tindikali kupitia electrolysis. Mikondo ya umeme inayosababishwa na electrodes inaweza kusababisha maji molekuli za kutenganisha na kutolewa ioni za H+.
Watu pia huuliza, kwa nini alama hutumiwa katika electrophoresis ya gel?
Vipande vidogo husogea haraka, na kwa hivyo zaidi, kuliko vipande vikubwa vinaporuka kupitia jeli . Kwa nini alama hutumiwa wakati wa kuendesha vipande kupitia jeli ? A alama ina vipande vya DNA vya ukubwa unaojulikana. Alama zinaendeshwa katika kila jeli kwa kulinganisha na vipande visivyojulikana katika vingine jeli vichochoro.
Ni DNA ngapi inaweza kuonekana kwenye gel ya agarose?
Wengi gel za agarose zinatengenezwa kati ya 0.7% na 2%. A 0.7% gel mapenzi onyesha utengano mzuri (azimio) wa kubwa DNA vipande (kb 5-10) na 2% gel mapenzi onyesha azimio nzuri kwa vipande vidogo (0.2-1 kb).
Ilipendekeza:
Jinsi ya kuhifadhi gel ya agarose?
9. Ikiwa huna muda wa kutosha wa kuendelea na electrophoresis ya gel ya Agarose, weka gel kwenye sanduku, iliyofunikwa na 25 ml ya 1x TAE buffer katika mfuko wa plastiki unaozibika kwenye joto la kawaida kwa siku 1, au kwenye jokofu (4 °). C) kwa hadi wiki 1 kabla ya kuzitumia. Hakikisha kuweka lebo kwenye mfuko wako wa plastiki
Kusudi la electrophoresis ya gel ni nini?
Mambo muhimu: Gel electrophoresis ni mbinu inayotumiwa kutenganisha vipande vya DNA kulingana na ukubwa wao. Sampuli za DNA hupakiwa kwenye visima (indentations) kwenye mwisho mmoja wa gel, na sasa ya umeme hutumiwa ili kuwavuta kupitia gel. Vipande vya DNA vinashtakiwa vibaya, hivyo huenda kuelekea electrode nzuri
Je, electrophoresis ya gel hutumia kipengele gani kutenganisha maswali ya molekuli za DNA?
Geli hufanya kazi kama ungo, ikitenganisha molekuli tofauti za DNA kulingana na saizi yao, kwani molekuli ndogo za DNA zitaweza kupita kwenye jeli haraka kuliko molekuli kubwa. Kemikali katika jeli ambayo DNA hupitia hufunga DNA na huonekana chini ya mwanga wa UV
Je, ni udhibiti mzuri na udhibiti hasi katika electrophoresis ya gel?
Udhibiti mzuri na hasi ni sampuli zinazotumiwa kuthibitisha uhalali wa jaribio la electrophoresis ya gel. Vidhibiti vyema ni sampuli zilizo na vipande vinavyojulikana vya DNA au protini na zitahamia kwa njia mahususi kwenye jeli. Udhibiti hasi ni sampuli ambayo haina DNA au protini
Ni nini electrode chanya katika electrophoresis?
Bila gel, DNA zote zingeenda sawa kwa electrode chanya (inayoitwa anode). Ukubwa wa pores hudhibiti kiwango ambacho DNA husonga. Mkusanyiko wa juu kiasi wa 1% agarose hutumiwa kutenganisha vipande vidogo vya DNA wakati viwango vya chini hutumika kutenganisha vipande vikubwa