Je, ni gharama gani kubadilisha ligation?
Je, ni gharama gani kubadilisha ligation?

Video: Je, ni gharama gani kubadilisha ligation?

Video: Je, ni gharama gani kubadilisha ligation?
Video: Ukristo Ni Gharama - Kinzudi Sda Church Choir 2024, Novemba
Anonim

Mabadiliko . Ongeza kati ya 1-5 µl ya kuunganisha mchanganyiko kwa seli zinazofaa mabadiliko . Imepanuliwa kuunganisha na PEG husababisha kushuka mabadiliko ufanisi (Haraka Ligation Kiti). Umeme unapendekezwa kwa miundo mikubwa (> 10, 000 bp).

Je, ni bidhaa ngapi za kuunganisha ninahitaji kwa mabadiliko?

Mabadiliko . Ongeza kati ya 1-5 µl ya kuunganisha mchanganyiko kwa seli zinazofaa mabadiliko . Imepanuliwa kuunganisha na PEG husababisha kushuka mabadiliko ufanisi (Haraka Ligation Kiti). Umeme unapendekezwa kwa miundo mikubwa (> 10, 000 bp).

Baadaye, swali ni, Ligation na mabadiliko ni nini? Katika jaribio la kawaida la uundaji wa jeni, watafiti huingiza kwanza kipande cha DNA, kama vile jeni, kwenye kipande cha duara cha DNA kinachoitwa plasmid. Hatua hii hutumia enzymes za kizuizi na ligase ya DNA na inaitwa a kuunganisha . Baada ya a kuunganisha , hatua inayofuata ni kuhamisha DNA ndani ya bakteria katika mchakato unaoitwa mabadiliko.

Baadaye, mtu anaweza pia kuuliza, ni kiasi gani cha DNA kinahitajika kwa kuunganisha?

Mkusanyiko wa jumla wa vekta + ingizo unapaswa kuwa kati ya 1-10 Μg/ml kwa ufanisi kuunganisha . Vekta:Ingiza uwiano wa molar kati ya 1:1 na 1:10 inapendekezwa (1:3 ni ya kawaida). Ikiwa huna uhakika na yako DNA viwango, fanya miunganisho mingi yenye uwiano tofauti.

Je, unaweza kuhifadhi majibu ya kuunganisha kwa muda gani?

Migogoro inaweza fanya kwa joto la kawaida au baridi zaidi (fikiria 12-16 ° C) usiku mmoja au hata kwa siku chache; kama wewe uko busy sana. Unaweza pia kuhifadhi ligation kwenye friji na uichukue baadaye ili kuendelea kuunganisha kwenye joto la kawaida kwa kama ndefu kama inavyohitajika.

Ilipendekeza: